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本生淺談：酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試驗辦法
酶聯(lián)免疫測定是將抗原抗體反響的高度特異性和酶的催化作用相結合，開展建立一種非放射性符號免疫分析辦法。因為ELISA具有靈敏度高、特異性強，酶免疫試劑的性質(zhì)比較穩(wěn)定，操作辦法簡潔快速、無放射性污染以及應用范圍廣等很多優(yōu)點，在醫(yī)學根底理論研究，病毒學和生物化學查驗等工作中應用十分廣泛。
該法需將純化的抗原包被在固相載體，與必定稀釋度的待側血清反響，然后與酶符號的第二抗體(抗人IgG,IgA,IgM或抗人IgG.A.M的混合物)反響，酶可催化色原反響，在酶標測定儀必定波長下進行比色，測定吸光度。
ELISA試劑盒的關鍵是要具備高質(zhì)量純化或重組的抗原，對生產(chǎn)廠家的抗原要求很高。因為純化的或重組的抗原越來越多，以及商品化的高質(zhì)量的ELISA試劑盒的面市，它應用于臨床免疫試驗室的本身抗體的檢測已日漸增多，該法檢測本身抗體快速、靈敏及特異性高。
一、免疫熒光法----本身抗體確診的標準技能(IFA)
免疫熒光測定法可分為直接和直接兩類，在本身抗體檢測中，以直接免疫熒光法zui為常用。因為本身抗原的方位決議了其相應的抗體的典型熒光形式，該法能經(jīng)過顯微鏡觀測地判別安排或細胞內(nèi)熒光的分布。
將已稀釋血清與試驗基質(zhì)進行溫育，令特異性抗體與試驗基質(zhì)中相應抗原結合，然后再與熒光符號的第二抗體溫育，zui后在熒光顯微鏡下觀察相應部位的特異性熒光形式。
此辦法靈敏、重復性好。但需要一臺質(zhì)量較好的熒光顯微鏡，且對操作人員要較高，操作雜亂耗時長，繁瑣。
二、免疫印跡法(Immunoblot assay)(westerblot)
此法是將聚丙xi酰胺凝膠電泳別離蛋白及多肽與免疫反響的高特異性相結合的一項技能。蛋白質(zhì)在電泳中依分子量大小別離，然后將別離好的蛋白轉印到硝酸纖維薄膜上，用酶符號的抗體或蛋白A進行染色。該法簡單、快速。是現(xiàn)在美國、中國等國際上很多國家衛(wèi)生機構的zui終承認辦法。但其制備辦法繁瑣、本錢相對較高。
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