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堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)試劑盒標(biāo)本的采集與保存
更新時(shí)間:2024-08-06瀏覽:253次

  堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)試劑盒標(biāo)本的采集與保存

  1. 血清:

  將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置 2 小時(shí)或 4oC 過(guò)夜,然后 1000×g 離心 20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  2. 血漿:

  用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  3. 組織勻漿:

  1) 取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);

  2) 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨,該過(guò)程需在冰上進(jìn)行(有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融 進(jìn)一步處理(超聲破碎過(guò)程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2 次)。

  3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘,留取上清即可檢測(cè)。

  4. 細(xì)胞裂解液:

  1)貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化,離心收集細(xì)胞(懸浮細(xì)胞可直接離心收集);

  2)將收集到的細(xì)胞用冷PBS 洗3 次;

  3)物理方法裂解細(xì)胞(可先超聲破碎細(xì)胞,再反復(fù)凍融):

  i 超聲破碎:取適量PBS 重懸細(xì)胞,用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液,使細(xì)胞急劇震蕩破裂。

  ii 反復(fù)凍融:將待破碎的細(xì)胞在-20 oC 以下冰凍,室溫融解,反復(fù)3 次,使細(xì)胞溶脹破碎。

  4)將標(biāo)本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘,收集上清備用。

  5. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本:

  請(qǐng) 1000×g 離心 20 分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  注意:

  1. 以上標(biāo)本均需密封保存,4oC保存應(yīng)小于1周,-20oC不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月,-80oC不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月。

  2. 標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,不應(yīng)加熱使之融解。

  3. 實(shí)驗(yàn)前紅細(xì)胞裂解液必須用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋。

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