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影響ELISA試劑盒測(cè)定成果的原因和解決辦法,有哪些?
更新時(shí)間:2024-09-06瀏覽:233次

  影響ELISA試劑盒測(cè)定成果的原因和解決辦法,有哪些?

  ELISA是什么?

  ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的簡(jiǎn)稱。它是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù) 。

  酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再加入一級(jí)檢測(cè)抗體(primarydetection Ab),形成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶(enzyme)標(biāo)記了,即可用來(lái)直接測(cè)定抗原的量,若無(wú),則可利用另一個(gè)酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原的量。測(cè)定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)(substrate),作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系,依此原理計(jì)算出樣本中的抗原總量或濃度。

  ELISA試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定,具有靈敏度高,操作簡(jiǎn)略等優(yōu)點(diǎn),但是在詳細(xì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中影響要素較多,而且要按照嚴(yán)厲的闡明要求,在臨床檢驗(yàn)中除正常反響外,有時(shí)??梢?jiàn)到一些錯(cuò)誤成果(即假陽(yáng)性或假陰性成果)。

  影響ELISA測(cè)定錯(cuò)誤成果的原因主要有:

 ?、贅?biāo)本要素;

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  一、類風(fēng)濕因子

  人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)能夠與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶符號(hào)二抗的FC段直接結(jié)合,然后導(dǎo)致假陽(yáng)性。

  解決辦法:

  1.用F(ab)2替代完好的IgG;

  2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有用);

  3.檢測(cè)抗原時(shí),能夠用2-巰基yi醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。

  二、補(bǔ)體

  ELISA系統(tǒng)中固相一抗和符號(hào)二抗過(guò)程中,抗體分子發(fā)作變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來(lái),使C1q 能夠?qū)⒍哌B接起來(lái),然后形成假陽(yáng)性。

  解決辦法:

  1.用EDTA稀釋標(biāo)本;

  2.用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。

  三、嗜異性抗體

  人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物(如鼠等)Ig(s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來(lái),也能形成假陽(yáng)性。

  解決辦法:

  可在標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig(s),但加入量不足或亞類不同時(shí)無(wú)效。

  四、嗜靶抗原的本身抗體

  抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體,有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定成果。

  解決辦法:

  測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。

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